Hallo miteinander (diesmal vorallem die Biologen und Biochemiker )
Nachdem ich am Mikromanipulator gescheitert bin, möchte ich mich mal im Grenzverdünnungsklonen versuchen (Danke Lars für die Erklärung!), um aus einer Mischkultur zwei Reinkulturen zu erhalten, und bin mir nicht sicher ob ich alles richtig durchdacht und berechnet habe:
Mit Neubauer improved Zählkammer (Danke Beni!) inkl. Deckglas (Danke Mäge!) habe ich 5 Gruppenquadrate der unverdünnten Mischkultur ausgezählt. Ergebnis: 247 Zellen A, 133 Zellen B. Das bedeutet 12,35 Mio Zellen A und 6,65 Mio Zellen B pro ml. Soweit richtig?
Nun möchte ich eine Verdünnung dieser Kultur, sodass in jedem dritten Tropfen eine Zelle A ist. Das würde bedeuten in jedem sechsten Tropfen ist eine Zelle B. Von dieser Verdünnung will ich dann jeweils einen Tropfen in eine Vertiefung einer Mikrotiterplatte geben, und diese mit Nährlösung auffüllen, um daraus reine Kulturen zu bekommen.
Zwischenfrage: aus 96 Tropfen, wie viele Reinkulturen aus Zellen B sollte es theoretisch geben?
Und weiter: etwa 21 Tropfen ergeben einen ml, statistisch jeder dritte Tropfen soll eine Zelle A enthalten -> 7 Zellen pro ml. Ergibt eine Verdünnung von knapp 2 Millionen. 2 Tropfen Mischkultur (100 ul) in 1 dl verdünnt = 1:1000. Davon 2 Tropfen in 2 dl verdünnt = 1:2'000'000. Richtig?
Eines der 5 Gruppenquadrate:
Zählkammer.jpg
Wenn mir jemand sagen könnte ob ich auf dem richtigen Weg bin wäre ich froh!
Gruss Christian
Nachdem ich am Mikromanipulator gescheitert bin, möchte ich mich mal im Grenzverdünnungsklonen versuchen (Danke Lars für die Erklärung!), um aus einer Mischkultur zwei Reinkulturen zu erhalten, und bin mir nicht sicher ob ich alles richtig durchdacht und berechnet habe:
Mit Neubauer improved Zählkammer (Danke Beni!) inkl. Deckglas (Danke Mäge!) habe ich 5 Gruppenquadrate der unverdünnten Mischkultur ausgezählt. Ergebnis: 247 Zellen A, 133 Zellen B. Das bedeutet 12,35 Mio Zellen A und 6,65 Mio Zellen B pro ml. Soweit richtig?
Nun möchte ich eine Verdünnung dieser Kultur, sodass in jedem dritten Tropfen eine Zelle A ist. Das würde bedeuten in jedem sechsten Tropfen ist eine Zelle B. Von dieser Verdünnung will ich dann jeweils einen Tropfen in eine Vertiefung einer Mikrotiterplatte geben, und diese mit Nährlösung auffüllen, um daraus reine Kulturen zu bekommen.
Zwischenfrage: aus 96 Tropfen, wie viele Reinkulturen aus Zellen B sollte es theoretisch geben?
Und weiter: etwa 21 Tropfen ergeben einen ml, statistisch jeder dritte Tropfen soll eine Zelle A enthalten -> 7 Zellen pro ml. Ergibt eine Verdünnung von knapp 2 Millionen. 2 Tropfen Mischkultur (100 ul) in 1 dl verdünnt = 1:1000. Davon 2 Tropfen in 2 dl verdünnt = 1:2'000'000. Richtig?
Eines der 5 Gruppenquadrate:
Zählkammer.jpg
Wenn mir jemand sagen könnte ob ich auf dem richtigen Weg bin wäre ich froh!
Gruss Christian
Mitglied VMN und SDAT